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植物CRISPR单碱基编辑

浏览次数:173|来源:飞凡检测 | 2022-03-04 09:22:18

由于同源重组修复与非同源末端连接相比发生频率较低,所以科学家开发了用于单碱基编辑的系统。该单碱基编辑系统不需要诱导DNA双链断裂,也不需要加入DNA修复模板即可实现位点单碱基的改变。该技术已成功地应用于多种单子叶植物和双子叶植物,如小麦、水稻、玉米、拟南芥和番茄等。

CRISPR单碱基编辑系统包含一个失活的Cas9(dead Cas9,dCas9)或仅可造成缺口的Cas9(Cas9 nickase,nCas9)和胞苷脱氨酶或腺嘌呤脱氨酶。胞嘧啶碱基编辑系统(cytidine base editors,CBEs)可将胞嘧啶(C)转变为尿嘧啶(U),尿嘧啶随后通过DNA复制或修复的方式转变为胸腺嘧啶(T)。类似地,腺嘌呤碱基编辑系统(adenine base editors,ABEs)可将腺嘌呤(A)转变为肌苷(I),然后转变为鸟嘌呤(G),从而实现A到G的转换。

具代表性的胞嘧啶(左)和腺嘌呤(右)单碱基编辑系统

图1. 具代表性的胞嘧啶(左)和腺嘌呤(右)单碱基编辑系统(Eid et al., 2018)。

实验流程:

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