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植物TALENs基因编辑

浏览次数:411|来源:飞凡检测 | 2022-03-10 09:06:10

类转录激活因子效应物核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)是一种多功能的基因组编辑工具,已在植物基因功能研究和育种中得到了广泛的应用。与锌指核酸酶(zinc finger nucleases,ZFNs)相比,该技术具有脱靶率低和细胞毒性低的优点,TALENs采用简单的蛋白质- DNA识别机制。苏州飞凡标准技术服务有限公司拥有丰富的植物基因编辑经验。

TALENs由DNA结合域和具限制性内切酶活性的FokI组成(图1)。DNA结合域通常由1.5-33.5个串联重复序列组成。每个重复序列包含34个氨基酸,其中第12和第13个氨基酸为可变的,称为“重复可变双残基”(repeat variable diresidues,RVDs),它们可特异性地识别一个核苷酸。简而言之,RVDs的解码机制是NI (Asn Ile)、HD (His Asp)、NN (Asn Asn)和NG (Asn Gly)可分别识别A、C、G、T(图1)。由FokI组成的DNA切割域通常以二聚体的形式行使功能,且可切割序列从而造成DNA双链断裂。断裂的DNA双链一般通过非同源末端连接或同源重组修复两种方式进行修复,修复过程中会在断裂位点产生不同形式的突变:如点突变、缺失、插入、倒置、复制和易位等。

类转录激活因子效应物核酸酶的结构 

图 1. 类转录激活因子效应物核酸酶的结构(Wei et al., 2013)。

苏州飞凡可提供多种技术来实现TALE蛋白的定制合成,如限制性酶切连接法(restriction enzyme and ligation,REAL)、基于PCR的gold gate法(GG-PCR)、基于质粒载体的GG法(GG-Vector)、高通量TALE合成技术(fast ligation-based automatable solid-phase high-throughput,FLASH)、迭代加帽组装法(iterative capped assembly,ICA)、基于长粘末端的LIC(ligation-independent cloning)组装法和单元组装法(unit assembly,UA)等。我们还可以提供修饰的FokI,从而可以使它形成异源二聚体,提高剪切特异性。我们可以提供多种植物的遗传转化,如拟南芥、水稻、小麦、苜蓿、玉米、烟草和棉花等,可以满足客户的不同需求。

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