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16886.3检测Ames试验

浏览次数:9|来源:飞凡检测 | 2020-11-20 09:48:07
飞凡检测可依据GB/T 16886.3-2019 进行细胞回复骤变实验测验,陈述具有CMA/CNAS资质。

  Ames实验全称污染物致骤变性检测。Ames实验的惯例办法有斑驳实验和平板掺入实验。

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  目的和原理
  鼠伤寒沙门氏菌的缺点型菌株,在含微量组氨酸的培育基中,除极少数自发回复骤变的细胞外,正常情况下只可以分裂几次,可以形成在显微镜下才可以见到的微菌落。受诱外界影响效果后,很多细胞发生回复骤变,自行组成组氨酸,发育了成肉眼就可以看见的菌落。鉴于化学物质的致骤变效果与致癌效果之间密切相关,故此法现广泛应用于致癌物的挑选。
  步骤和办法
  Ames实验的惯例办法有斑驳实验和平板掺入实验。
  1.菌株判定 用于测验的菌株,需经基因型 和生物学性状判定,符合要求才干投入使用。
  目前推荐使用的一套菌株是TA97、TA98、TA100和TA102。判定前先进行增菌培育。为判定成果可靠,需一起培育野生型TV菌株,作为测验菌基因型之对照。增菌培育用牛肉膏蛋白胨液体培育基,接种后于37℃,100r/min振荡培育12h左右,细菌生长相为对数期末,含菌数应为1×109个/ml~2×109个/ml。
  判定项目:
  (1)脂多糖屏障丢失(rfa)用接种环或一端挠起的接种针以无菌操作术取各菌株的增菌培育液,在养分琼脂平板上别离划平行线,然后用灭菌尖头镊夹取灭菌滤纸条,浸湿结晶紫溶液,贴放在平板上与各接种平行线笔直相交。盖好皿盖后倒置于37t温箱,培育24h后调查成果。
  (2)R因子 划线接种,贴放滤纸条及培育等均同上,唯滤纸条浸湿的药液不同,为氨苄青霉素钠溶液。TA102除pKM101外,还有pAQ1,载有抗四环素的基因,故另用滤纸条浸湿四环素溶液后贴放于划线接种的平板上。
  (3)紫外线损害修正缺点(△uvrB)在养分琼脂平板上按上述办法划线接种后,一半接种线用黑玻璃隐瞒,另一半露出于紫外光 下8sec,然后盖好皿盖并用黑纸包裹平皿,防止可见光修正效果。培育同上。
  (4)自发回变 预先制备底平板;向灭菌并在水浴内保温45℃的上层软琼脂中注入0.1ml菌液;混匀后倾于底平板上并铺平。平皿倒置于37℃温箱培育48h。
  (5)回变特性--确诊性实验 上层软琼脂中除菌液外,还注入已知阳性物之溶液,需活化体系者并参加S9mix,余同上。
  组氨酸养分缺点型 由自发回变即可知。
  2.斑驳实验 汲取测验菌增菌培育后的菌液0.1ml,注入融化并保温45℃左右的上层软琼脂中,需S9活化的再加0.3ml-0.4mlS9mix,立即混匀,倾于底平板上,铺平冷凝。用灭菌尖头镊夹灭菌圆滤纸片边际,纸片浸湿受试物溶液,或直接取固态受试物,贴放于上层培育基的外表。一起做溶剂对照和阳性对照,别离贴放于平板上相应方位。平皿倒置于37℃温箱培育48h。在纸片外围长出密布菌落 圈,为阳性;菌落分布,密度与自发回变相似,为阴性。
  3.平板掺入实验 将一定量样液和0.1ml测验菌液均参加上层软琼脂中,需代谢活化的再加0.3ml-0.4ml S9mix,混匀后敏捷倾于底平板上铺平冷凝。一起做阴性和阳性对照,每种处理做3个平行。试样通常设4个~5个剂量。挑选剂量范围开始应大些,有阳性或可疑阳性成果时,再在较窄的剂量范围内确认剂量反应联系。培育同上。同一剂量各皿回变菌落均数与各阴性对照 皿自发回变菌落均数之比,为致变比(MR)。MR值≥2,且有剂量-反应联系 ,布景正常,则判为致骤变阳性。
  飞凡检测Ames实验流程
  1、电话咨询400-8050-463,了解检测陈述用处及检测项目内容。
  2、邮递样品,同城当日达,异地隔日达。
  3、工程师报价,详细价目报价表。
  4、签订检测协议,付出部分或悉数费用。
  5、等待实验成果,出具检测陈述。
  6、邮递检测陈述,其他售后服务。



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