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单克隆抗体从头测序

浏览次数:21|来源:飞凡检测 | 2021-11-18 15:48:31

单克隆抗体分子在药物研发、诊断试剂开发中扮演了关键的角色。抗体分子本身的一级结构,特别是其CDR区域的氨基酸序列是发挥其生物学功能的核心,对其完整序列准确快速的分析具有十分重要的意义。例如对市场上已有的抗体产品直接进行序列分析是开发抗体药物,抗体诊断试剂和其它抗体产品的捷径;许多商业可得的抗体对于药物靶点有中和活性,通过单抗序列测定得到该抗体的一级序列,可以以此为基础可进行抗体亲和力提升和人源化来开发抗体药物;在进行抗体仿制药物研发过程中,原研药本身准确的一级结构信息是进行抗体仿制药研发的基础和前提。
飞凡检测基于先进的高分辨率质谱仪Obitrap Fusion Lumos,结合丰富的生物信息学分析经验,建立了全新一代抗体测序平台,实现对抗体一级结构快速准确的分析。该平台适用于不同亚型抗体(例如IgG和IgM)和不同类型抗体(荧光偶联抗体,固定化抗体,不同物种的抗体)的序列分析。

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单克隆抗体从头测序服务优势:

1. 单抗轻重链肽段全序列覆盖
在进行抗体序列测定过程中百泰派克会选择5种不同的蛋白酶进行酶切,利用不同酶切肽段之间的互补性实现抗体分子轻重链100%全序列的拼接。而对于抗体核心区域CDR序列在进行序列分析过程中要求至少被鉴定到10次,以此来充分保证测序结果的准确性(如下图所示)。

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2. 先进的数据处理算法
飞凡检测基于发表在Nature Biotechnology和专业的蛋白组学杂志JPR上的文献,结合现有的专业进行抗体序列分析的软件PEAKS Mass Spectrometry Software,开发了自己的质谱原始数据计算方法,采用宽进窄出的原则,在不遗漏任何有效数据信息的同时实现了抗体序列的准确鉴定。

3. 高精度和准确性
飞凡检测在测序过程中会使用目前分辨率和高灵敏度Orbitrap Fusion Lumos质谱仪;与老一代的质谱仪(例如Obitrap Elite、Q Exactive等)相比,Lumos在提高了一级二级质谱扫描速度的同时保证肽段分子量的准确性;一级质谱扫描速度的提高,有助于同一个肽段可以更多次的被鉴定到,提高了结果的可信性;二级质谱扫描速度的提高可以更好的进行片段碎裂(如下图所示),从而保证结果的准确性,并可以通过二级碎裂片段的特征峰实现亮氨酸和异亮氨酸的准确判定。

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4. 可对多种亚型和不同类型的抗体进行测序
我们建立的技术平台不受小基团(如FITC、Biotin、Alexa)的影响,虽然较大的蛋白基团会给测序带来难度,但若提供较高浓度的蛋白仍可成功测序。

5. 严谨的序列预测和严格的序列验证
我们对测序的结果会首先进行序列的预测,标明抗体的CDR区域(如下图所示);同时,我们还会以测定的序列建立新的数据库,采用Sequence Confirmation的模式对采集到的质谱数据再次进行分析,只有完全匹配的结果我们才会提供给客户。

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