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CHO-GS重组蛋白表达服务

浏览次数:23|来源:飞凡检测 | 2021-11-09 15:07:21

 飞凡一直致力于重组蛋白表达与抗体制备研究。我们的科学家拥有丰富的哺乳动物蛋白重组表达、发酵和纯化经验,能够快速为不同客户制定定制化的蛋白哺乳细胞表达方案。

我们的哺乳动物重组蛋白表达可依托中国仓鼠卵巢细胞(Chinese Hamster Ovarian Cells ,CHO)CHO细胞目前主要用于研究的有三种,分别是DUXB11 , DG44 , CHO-K1 。其中DUXB11DG44属于DHFR缺陷型, CHOK1为野生型。 CHO-S CHO-K1驯化后的悬浮细胞。使用 CHO 细胞进行蛋白表达时,最常使用两种基因选择系统:DHFR/MTX  GS/MSX。在飞凡提供的蛋白表达哺乳动物系统中,CHO 细胞表达系统参与了超过 70% 的重组生物制药蛋白质的研究。 CHO-GS 细胞系是世界范围内用于治疗性抗体蛋白表达的流行的表达系统。

飞凡检测实验室提供的基于CHO 细胞重组蛋白表达系统主要使用无血清 CHO 培养基。 

CHO-K1细胞系:

亲代 CHO 细胞系的亚克隆,来自成年中国仓鼠的卵巢。由于缺乏脯氨酸合成基因,细胞需要脯氨酸,生物合成链中的障碍在于将谷氨酸转化为谷氨酰胺γ丝醛的步骤。它们会因霍乱毒素而发生形态变化。

应用:营养和基因表达研究仓鼠的 CHO-K1 细胞系已用于通过庆大霉素保护试验研究质粒 pCM01 诱导对细菌与 CHO-K1 细胞结合的影响。它还可以在有或没有乳酸的情况下培养,以测量细胞增殖的时间序列。

CHO表达的优势:

--CHO 细胞在复杂蛋白质的蛋白质折叠方面表现出色,具有准确的转录后修饰功能,表达的蛋白在分子结构、理化特性和生物学功能方面最接近于天然蛋白分子

--CHO 细胞可以在无血清细胞培养基中生长良好,消除了血清作为传染源的潜在来源,提供了更高的安全性

--既可贴壁生长,又可以悬浮培养,且有较高的耐受剪切力和渗透压能力

--具有重组基因的高效扩增和表达能力,外源蛋白的整合稳定

--CHO 细胞的蛋白质产量很高——通常可以达到2 – 6 g/L

--无血清培养基中的 CHO 细胞可轻松进行下游加工

--CHO 细胞可以瞬时或稳定转染以表达蛋白质

--在单克隆抗体的情况下,中国仓鼠卵巢 (CHO) 和 NS0 (小鼠骨髓瘤) 细胞是最常用的细胞系

GS系统工作原理:

1显示了 GS 酶如何催化谷氨酸和氨生成谷氨酰胺,从而使细胞能够复制。

 CHO 细胞中的蛋白质表达系统有 GS 缺失时,研究人员用重组 DNA转染CHO 细胞,该 DNA 由与 GS 基因密切相关的目的基因组成。甲硫氨酸亚砜胺 (MSX) 选择系统用于选择产生目标蛋白质的 CHO 细胞。 MSX 是一种类似于谷氨酸的药物,可与 GS 结合,从而抑制谷氨酰胺的产生,而谷氨酰胺是细胞生长所必需的。在基因扩增过程中,CHO 细胞在高水平的 MSX 中培养。选择具有目标基因的 GS 基因拷贝数增加的 CHO 细胞。GS 水平不足的 CHO 细胞会死亡。一旦选定,来自 CHO GS 阴性宿主的转染细胞系不需要培养基中的 MSX

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表达系统的选择

DHFR 系统用于 CHO 细胞,其中突变型 CHO dhfr细胞系用含有靶基因和dhfr的载体转染标记基因。选择发生在不含次黄嘌呤、甘氨酸和胸苷的培养基中。同时,由于 MTX 能够抑制 DHFR 酶,因此逐渐增加甲氨蝶呤 (MTX) 浓度以放大蛋白质产物的表达。GS 系统已用于 NS0  CHO细胞系,其中细胞用除 GS 基因外还含有目的基因的载体转染。拥有GS基因的细胞可以合成自己的细胞内谷氨酰胺;因此,这些细胞可以在添加谷氨酸和天冬酰胺提供的氨基团的无谷氨酰胺培养基中培养。

 DHFR 系统相比,GS 选择系统的一个优点是细胞培养物产生的氨较少,这会对重组蛋白的糖基化产生负面影响;此外,GS 系统通常提供较短的选择周期,因为该系统需要较低的基因拷贝数来实现类似的扩增转基因表达水平。

GS-CHO系统的表达载体

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客户提供:

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