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CHO-DHFR重组蛋白表达服务

浏览次数:19|来源:飞凡检测 | 2021-11-09 15:18:10

飞凡拥有高素质的专家和十多年的上游生物制药开发经验,为您提供重组蛋白表达与抗体制备研究服务。飞凡检测基于的CHO细胞,采用GS/DHFR表达系统。将进行瞬时转染评估以确保选择稳定的单克隆。我们的细胞系广泛用于基因功能研究、基因编辑、药物筛选和重组蛋白生产。

DHFR体系是目前被广泛使用的体系,并且也是在工业生产中常用的方法。但该体系的缺点也是很明显的,耗时耗力费时费力,并且获得高产克隆需要重复选择和克隆的循环。此外,通过Dhfr /Mtx 方法获得的高产克隆通常不稳定随着细胞培养时间的延长,蛋白质合成迅速减少。 

DHFR系统工作原理: 

1显示了 DHFR 酶如何催化叶酸转化为四氢叶酸。这种前体是细胞复制的,嘌呤和嘧啶从头合成所必需的。

CHO 细胞中的蛋白质表达系统有 DHFR 缺失时,研究人员用重组 DNA转染CHO 细胞,该 DNA 由与 DHFR 基因紧密相连的目的基因组成。甲氨蝶呤 (MTX) 选择系统用于选择产生目标蛋白质的 CHO 细胞。MTX 是一种类似于叶酸的药物,它与 DHFR 结合,从而抑制四氢叶酸的产生,而四氢叶酸是嘌呤和嘧啶从头合成所必需的。

在基因扩增过程中,CHO 细胞在越来越高水平的 MTX 中培养。将选择具有增加的 DHFR 基因拷贝并结合感兴趣的基因的 CHO 细胞。

DHFR 水平不足的 CHO 细胞被剥夺了核苷前体(次黄嘌呤和胸苷)并死亡。一旦被选中,来自 CHO DHFR 阴性宿主的转染细胞系不需要培养基中的 MTX。 

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服务内容:

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